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新冠肺炎核酸检测假阴性率为何这么高 专家称病毒核酸被降解导致不能正常检出
来源:科技日报 作者:张 晔 2020-02-26 10:40

新冠肺炎疫情发生以来,关于核酸检测假阴性率过高的话题,一直是各方关注的焦点。有报道称,以荧光定量RT-PCR作为检测手段的新冠病毒检测的阳性率目前仅有30%—50%,导致奇高的假阴性率。

导致假阴性率发生的原因很多。2月22日,南京大学模式动物研究所发育生物学与遗传学教授赵庆顺接受科技日报记者独家采访时指出,依据有关机构发布的指南,核酸检测前需将采集到的样品进行56℃灭活,这极有可能使新冠病毒核酸被降解,从而导致不能被正常检出,最终提高了假阴性率。该研究成果《病毒核酸提取前的高温灭活过程显著降低可检出病毒核酸模板量》,已在中国科学院科技论文平台预发布。

56℃灭活可能导致病毒核酸被降解

2019新型冠状病毒的遗传物质是单链RNA。因此,科研人员的目标是在患者身上找到新冠病毒的RNA。这也是临床诊断金标准。

目前,临床检测主要采用荧光定量RT-PCR试剂盒检测。该方法是将标本中的特定RNA序列逆转录后进行扩增,经过30次以上扩增后,病毒基因片段达到一定数量即可进行可视检测。

“理论上,哪怕模板只有1个病毒,就有可能被检测出来。”赵庆顺说,科研实践中,在模板(病毒)量大于100个的情况下,扩增结果就会非常稳定。

但是,赵庆顺在网络上看到一个教学视频,不禁心生疑虑。该视频由北京协和医院和北京市卫健委联合制作。视频3分08秒至3分40秒显示:在制备核酸模板前,需将采集到的样品在56℃条件下进行30分钟病毒灭活。

记者在中华医学会检验医学分会发布的《2019新型冠状病毒肺炎临床实验室检测的生物安全防护指南(试行第一版)》中也看到:核酸扩增前,可以对标本先行消毒。包括56℃孵育30分钟,加蛋白酶K。

中华医学会检验医学分会发布的《新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识》中,明确指出需将样品56℃孵育至少45分钟或更高温度进行灭活。

记者通过采访确认,绝大多数检验医师均按照上述规范,进行56℃条件下时间不等的病毒灭活,然后才制备核酸模板。

这样做带来的问题是,病毒RNA极易被核糖核酸酶降解,因为这种酶在60℃时活性最高。核糖核酸酶来自两方面,一是样本细胞内,二是采集、保存、运输过程中的外来污染物。

责任编辑:戴雯
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